Extracción de esporas

Para determinar la diversidad de HMA de la rizósfera de determinada especie o comunidad vegetal, aislamos aquellas especies que estén formando esporas en el suelo en determinado condición o estacionalidad.

Metodología

La técnica empleada esta basada en la propuesta por Gerdemann & Nicolson (1963) y Brundrett (2008).

En resumen.

Pesar 100 gramos de suelo seco
Colocar los tamices en orden descendiente con respecto a la apertura de maya (1 mm hasta 30 um)
En un recipiente añadir 1L de agua corriente y el suelo, posteriormente agitar vigorosamente por un minuto y dejar reposar por 10 s.
Inmediatamente vertir la solución en la serie de tamices, evitando que el sedimento pase. (Repetir el paso 3 y 4 por tres veces, con el fin de recuperar la totalidad de esporas).
Colocar el residuo de cada tamiz en un tubo Falcon de 50mL y centrifugar a 3000 rpm durante 3 minutos con agua. Una vez finalizado el tiempo, descartar el sobrenadante.
Añadir sacarosa al 60% y al 20%, agitar el tubo para resuspender la mezcla.
Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
Posteriormente, verter el sobrenadante al tamiz de menor tamaño (Repetir 3 veces el paso 6 y 7 con el fin de recuperar todas las esporas).
Pasar sobrenadante a una caja Petri y comenzar con el aislamiento de esporas en el microscopio de disección.

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Tamizado

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Centrifugación en agua

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Recuperando sacarosa con esporas en el último tamiz

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Aislamiento de esporas

Búsqueda activa de esporocárpos en campo

Esta metodología esta basada en Jobim et al. (2019) y Crossay et al. (2026).

La búsqueda consiste en revisar cuidadosa y exhaustivamente la materia orgánica y la parte baja de las raíces expuestas de especies arbóreas potencialmente micorrízicas. Así mismo, en el área de influencia de la rizósfera, retirar la hojarasca y observar el suelo debido a que muchos esporocárpos pueden formarse de manera semi-epigea.

Colecta de esporocárpos

Realizando una busqueda minuciosa en la cercanía a la base del árbol y en el suelo.

Una vez que retiramos la hojarasca, podemos notar los pequeños esporocárpos (4-15 mm). Es importante destacar bajo que especie vegetal se encontró.

Es muy importante que al momento de tomar el esporocárpo, describamos características macrocópicas como textura, color (muchas tienden a oxidarse minutos después de colectarlo), aroma y número de individuos colectados por m2.

Observe como cambia el color de los especímenes (inferior derecha) minutos después de recolectactarlos.

Una vez en el laboratorio procederemos a describir nuestro espécimen.

1.- Obtener medidas, peso, color, presencia de rizomórfa.

2.- Tóma de fotografías de la parte interna y externa del esporocárpo.

Una fracción del espécimen se debe guardar en sílice gel como respaldo para posteriores análisis morfológicos y moléculares.

Realizaremos montajes de las diferentes partes qué compone el esporocárpo (peridio, gleba, hifas de la base y glomerosporas) en agua, PVLG y PVLG+Melzer 1:1 v/v.

Con apoyo de la goma de un lápiz, ejerceremos una ligera presión con la finalidad de abrir la espora y poder observar la pared y sus capas, además de analizar si alguna capa tiene reacción a Melzer.

Colocaremos nuestras preparaciones en una estufa de secado a 65° C por 24 horas.
Esto permitirá que se desplacen burbujas de aire, aceite y permitirá que nuestra preparación se fije permanentemente. Posterior a esté lapso, podemos observar al microscopio compuesto.

Literatura de interés

Jobim K, Błaszkowski J, Niezgoda P, Kozłowska A, Zubek S, Mleczko P, Chachuła P, Ishikawa NK, Goto BT. (2019). New sporocarpic taxa in the phylum Glomeromycota: Sclerocarpum amazonicum gen. et sp. nov. in the family Glomeraceae (Glomerales) and Diversispora sporocarpia sp. nov. in the Diversisporaceae (Diversisporales). Mycological Progress 18: 369-384.
Crossay T, Polo-Marcial MH, Esmaeilzadeh-Salestani K, Queiroz MB, Lima JLR, Lara-Pérez LA, de la Fuente JI, Szczecińska S, Wong M, Tedersoo L, Goto BT and Magurno F (2026) Splitting and filling the gaps: a reorganization of Corymbiglomeraceae and new taxa from trans-Pacific tropical regions. Frontiers in Microbiology. 17:1798260.