Extracción de esporas
Para determinar la diversidad de HMA de la rizósfera de determinada especie o comunidad vegetal, aislamos aquellas especies que estén formando esporas en el suelo en determinado condición o estacionalidad.
Metodología
La técnica empleada esta basada en la propuesta por Gerdemann & Nicolson (1963) y Brundrett (2008).
En resumen.
-
Pesar 100 gramos de suelo seco
-
Colocar los tamices en orden descendiente con respecto a la apertura de maya (1 mm hasta 30 um)
-
En un recipiente añadir 1L de agua corriente y el suelo, posteriormente agitar vigorosamente por un minuto y dejar reposar por 10 s.
-
Inmediatamente vertir la solución en la serie de tamices, evitando que el sedimento pase. (Repetir el paso 3 y 4 por tres veces, con el fin de recuperar la totalidad de esporas).
-
Colocar el residuo de cada tamiz en un tubo Falcon de 50mL y centrifugar a 3000 rpm durante 3 minutos con agua. Una vez finalizado el tiempo, descartar el sobrenadante.
-
Añadir sacarosa al 60% y al 20%, agitar el tubo para resuspender la mezcla.
-
Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
-
Posteriormente, verter el sobrenadante al tamiz de menor tamaño (Repetir 3 veces el paso 6 y 7 con el fin de recuperar todas las esporas).
-
Pasar sobrenadante a una caja Petri y comenzar con el aislamiento de esporas en el microscopio de disección.
%208_45_34%E2%80%AFp_m_.png)
Tamizado
%209_10_54%E2%80%AFp_m_.png)
Centrifugación en agua
%209_15_05%E2%80%AFp_m_.png)
Recuperando sacarosa con esporas en el último tamiz
%209_16_33%E2%80%AFp_m_.png)
Aislamiento de esporas
Búsqueda activa de esporocárpos en campo
Esta metodología esta basada en Jobim et al. (2019) y Crossay et al. (2026).
La búsqueda consiste en revisar cuidadosa y exhaustivamente la materia orgánica y la parte baja de las raíces expuestas de especies arbóreas potencialmente micorrízicas. Así mismo, en el área de influencia de la rizósfera, retirar la hojarasca y observar el suelo debido a que muchos esporocárpos pueden formarse de manera semi-epigea.
Colecta de esporocárpos
Realizando una busqueda minuciosa en la cercanía a la base del árbol y en el suelo.
Una vez que retiramos la hojarasca, podemos notar los pequeños esporocárpos (4-15 mm). Es importante destacar bajo que especie vegetal se encontró.
Es muy importante que al momento de tomar el esporocárpo, describamos características macrocópicas como textura, color (muchas tienden a oxidarse minutos después de colectarlo), aroma y número de individuos colectados por m2.
Observe como cambia el color de los especímenes (inferior derecha) minutos después de recolectactarlos.
Una vez en el laboratorio procederemos a describir nuestro espécimen.
1.- Obtener medidas, peso, color, presencia de rizomórfa.
2.- Tóma de fotografías de la parte interna y externa del esporocárpo.
Una fracción del espécimen se debe guardar en sílice gel como respaldo para posteriores análisis morfológicos y moléculares.
Realizaremos montajes de las diferentes partes qué compone el esporocárpo (peridio, gleba, hifas de la base y glomerosporas) en agua, PVLG y PVLG+Melzer 1:1 v/v.
Con apoyo de la goma de un lápiz, ejerceremos una ligera presión con la finalidad de abrir la espora y poder observar la pared y sus capas, además de analizar si alguna capa tiene reacción a Melzer.
Colocaremos nuestras preparaciones en una estufa de secado a 65° C por 24 horas.
Esto permitirá que se desplacen burbujas de aire, aceite y permitirá que nuestra preparación se fije permanentemente. Posterior a esté lapso, podemos observar al microscopio compuesto.
Literatura de interés
-
Jobim K, Błaszkowski J, Niezgoda P, Kozłowska A, Zubek S, Mleczko P, Chachuła P, Ishikawa NK, Goto BT. (2019). New sporocarpic taxa in the phylum Glomeromycota: Sclerocarpum amazonicum gen. et sp. nov. in the family Glomeraceae (Glomerales) and Diversispora sporocarpia sp. nov. in the Diversisporaceae (Diversisporales). Mycological Progress 18: 369-384.
-
Crossay T, Polo-Marcial MH, Esmaeilzadeh-Salestani K, Queiroz MB, Lima JLR, Lara-Pérez LA, de la Fuente JI, Szczecińska S, Wong M, Tedersoo L, Goto BT and Magurno F (2026) Splitting and filling the gaps: a reorganization of Corymbiglomeraceae and new taxa from trans-Pacific tropical regions. Frontiers in Microbiology. 17:1798260.